在确定印迹中是否存在抗原之前,通过对硝酸纤维素膜染色可了解转印至膜上的总蛋白质的组成情况,并可确定蛋白质分子质量标记物的位置和确信转印成功。同时,该方法也清楚地显示出转印蛋白质的复杂性。用于聚丙烯酰胺凝胶染色的常规方法不适用于免疫印迹的染色。由于对染料的非特异性吸附,考马斯亮蓝和银染方法均有较高的本底,当使用硝酸纤维素膜时,此类染色法还可损害膜并使其变形。现已研制出一些灵敏和高质量的硝酸纤维素膜印迹的染色方法。
内容来自实验室前沿网站
在使用任何一种有效的染色方法之前,都需先封闭印迹膜上剩余的蛋白质结合位点。如果转印的蛋白质量较少时,如在免疫沉淀或纯化蛋白质样品的研究中,一般认为印度墨汁染色法更灵敏,也较常用。若研究的是非纯化的蛋白质样品,则两种方法都可选用。
用于免疫印迹染色的染料
染料
|
优点
|
缺点
|
丽春红s
|
价格低廉
|
不够灵敏
|
|
适合于所有的抗原检测方法
|
不持久
|
印度墨汁
|
价格低廉
|
酶检测需用吐温封闭
|
|
灵敏
|
先检测,后染色
|
|
适合于放射性标记检测
|
不适合于化学发光和呈色底物的酶检测
|