免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,形成一定大小的抗原抗体复合物,使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时,形成的复合物随抗原量增加而增加,反应液的浊度亦随之增加,与一系列的标准品对照,即可计算出样品的含量。
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免疫浊度分析的光学基础是反应液中分散粒子对光的反射、折射、散射(衍射)和吸收等。粒子被光照射后而发光,这一现象主要取决于粒子的大小、入射光波长及粒径与波长的比例关系等等。当入射光作用于粒子后向各个方向发射光,甚至可绕过粒子发射光线,称散射或衍射光。但光照射到胶体溶液后,粒子的光学现象是复杂的,浊度法中检测的光信号成分主要为散射光或透射光。
免疫浊度测定技术按照仪器设计的不同可以分为两种,即透射比浊仪测定(turbidimete rmeasure)和散射比浊仪测定(nephelomete rmeasure)。比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减,其读数以吸光度A表示。A反映了入射光与透射光的比率(A=2一lg10T,T代表浊度百分比)。散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点(复合物)后呈一定角度散射的光量,该散射光经放大后以散射值表示。
透射光和散射光测定比较
Rayleigh、Debye和Mei等分别对光散射现象进行了系统研究,认为光散射强度10)与入射光强度(Iθ)的关系符合下述公式:
Iθ=Io×8π4×N×α2(1+COS2θ)/γ2×入2。
亦可表示如下:
Iθ=Io ×(24π3/λ4)×N×γ2×[(n2-n02)/(n2+2n02)]×(1+COS2θ)。
式中入和I0分别表示入射光的波长和强度,θ表示光信号检测器与入射光之间的夹角,Iθ表示与入射光束成θ角度处散射光的强度,r表示微粒分子至检测器的距离,α表示分子极化率,N表示每单位容积分子数目,n和n。分别为粒子和溶剂的折射率。
在免疫化学反应中,可溶性抗原与抗体反应,形成免疫复合物,反应系统中的粒子由小变大,相应地也会出现散射光强度随角度而变的情况。因此上述理论为免疫浊度法的研究、仪器和试剂的设计、实验条件的优化及临床应用奠定了理论基础。