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微量滴定板中表达噬菌体抗体步骤及方法

时间:2010-07-07 02:14|来源:实验室前沿| 分享|点击:


[器材和试剂]
1.用于细菌培养的无菌96孔圆底微量滴定板,如Nune 62162(可自VWR购得)
2.  2×TY/amp/glu培养基
3.  含30%甘油的2×TY/amp/glu培养基(2×TY/amp/glu/gly)
4.  2×TY/amp/kan培养基
5.  选自铺板培养或抗体文库选择的克隆株
 
[方法]
1.用无菌牙签挑取单个克隆,分别置于每孔含100tH 2×TY/amp/glu的96孔微量滴定板  板孔中。振荡(300r/rain)培养过夜,最好放在微量滴定板架上。
2.每孔加入50ul2×TY/amp/glu/gly并储存于-70℃。
3.使用96孔无菌转移设备或移液器,从主板每孔中吸取2ul,接种到一块每孔含150ul 2×TY/amp/Rlu的96孔板中。37℃振荡,直到A600值接近0.5(2.5小时)。
4.每孔加入50ul含2X109pfu/m1辅助噬菌体(在储存料中稀释)的2×TY/amp/glu。噬菌体与细菌的比例应当接近20:1。37℃下孵育孔板30分钟。
5.以2700r/min离心孔板10分钟,用多道移液器或吸取设备移除上清。
6.用150l 2×TY/amp/kan重悬每孔的细菌沉淀。  因为抗体表达取决于1acZ启动子的渗漏表达,因此这一步要去除葡萄糖。37℃振荡(300r/min)培养孔板过夜。
7.次日,以2700r/min离心孔板10分钟;每孔取50F1上清用来进行噬菌体ELISA。
Tags:方法,步骤,表达,培养,2TY/amp/glu,孔板,分钟,
责任编辑:丁军

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