凝胶固定法
在很多实验中,电泳分离的蛋白质需要将其沉淀或结合在凝胶内,这类技术统称为固定。各种浓度和厚度的凝胶都可用酸或醇类固定。通常是在室温下将凝胶浸入12.5%三氯乙酸或脱色剂(70%乙酸和25%的甲醇)内。如果用溴酚蓝作为示踪剂,它亦可作为pH指示剂以判断酸是否已扩散入凝胶。在pH5.0以下溴酚蓝变为黄色,再继续温育10min。如果采用示踪剂或溴酚蓝染料已泳出凝胶末端时,对imm厚度以内的凝胶需固定30min,1—1.5mm的凝胶需固定45min,1.5mm以上的凝胶需固定1h。
凝胶干燥法
1.用水冲洗凝胶。
2.将凝胶置于塑料膜上,切去凝胶右下侧一小角已作为第1泳道的标记。
3.用锋利的手术刀片仔细切下比凝胶稍大的塑料膜。
4.放一张吸水纸(Whatman 3MM或同等物,剪成略大于凝胶,但比凝胶干燥机的尺寸小)在凝胶上。如果纸片干燥,凝胶可粘着于纸上,比较容易处理。
5.再将上述三者放在凝胶干燥机内的另一张吸水纸上。顺序是:塑料膜、凝胶、吸水纸,然后用真空泵抽吸,并轻微加热。对于大多数常用浓度的凝胶,由水吸式或真空泵形成的真空已足够进行干燥,但在多数情况下,家用真空器的干燥过程则过于缓慢。可以从上端(塑料膜端)或底部加热,但在上端加热时,浓度较高的凝胶偶尔发生破裂。
6.干燥30min~2h(微型胶干燥30min,2mm或较厚的胶需干燥2h)。撤去真空装置,取出凝胶。至此,干燥的凝胶已可用于X线片曝光或保存。