凝胶铜染法是传统的考马斯亮蓝或银染法的替代染色方法。将凝胶在氯化铜(CuCl2)溶液中温育,在Tris和SDS同时存在时可形成明显的白色不透明沉淀物。蛋白条带仍然清晰,留下一个多肽分离模式的负染图像。蛋白未结合在凝胶上,可通过EDTA螯合剂去除Cu离子而得以洗脱。此方法特别适用于需快速定位蛋白条带用于免疫反应,或进一步进行蛋白质化学研究。染色模式如同考马斯亮蓝或银染法的凝胶,容易进行拍照。
copyright sysqy.com
1.电泳后,凝胶需用蒸馏水短时清洗数次,每次30s。勿洗过长时间。
2.将凝胶置于玻璃或塑料盘中,加入至少5倍体积的0.3mol/L CuCl2
3.室温下振摇温育5min,较厚的凝胶可适当延长温育时间。当CuCl2进入凝胶时,在不含蛋白的区域会出现白色沉淀。
4.用蒸馏水清洗数分钟。在黑色背景下观察结果。
灵敏度大约为10—100ng蛋白/每条带(0.5mm厚的凝胶)和大约1ug蛋白/每条带(厚imm的凝胶)。
注:将凝胶在0.25mol/LEDTA、0.25mol/LTris溶液中温育可使铜染消退(逆转)。